顯微鏡攝影的基本步驟

一． 顯微攝影的基礎知識

1． 顯微攝影裝置的放大倍率
照片的放大倍率，決定于照相目鏡的型號和顯微攝影裝置的投影長度。如前所述，目前光學顯微鏡的光路系統是*無限遠光學校正系統，與以前的有限遠光學校正系統有了很大的改進。所以兩種系統的照片放大倍率計算方法不同。
(1) 有限遠光學校正系統：　照片總放大倍率=物鏡放大倍率X照相目鏡放大倍率（沒有中間附件時）或 照片總放大倍率=物鏡放大倍率X照相目鏡放大倍率X中間附件系數（連接有中間附件時）。
(2) *無限遠光學校正系統：　照片總放大倍率=物鏡放大倍率X照相目鏡放大倍率（中間附件不影響放大倍率）。
(3) 大版照相：照片總放大倍率=物鏡放大倍率X照相目鏡放大倍率X 3。
照片的總放大倍率是指底片上圖象的放大倍率，而不是指底片沖洗到相紙后的放大倍率。
2． 物鏡與目鏡的不同組合，得到的分辨率不同
即使照片的總放大倍率相同，它的分辨率是根據物鏡、目鏡的不同組合而不同的。在顯微攝影時應盡量使用低倍照相目鏡與高倍物鏡組合，這樣能改進底片平面象的分辨率。
3． 標本畫面的構圖
顯微攝影時，視場中的標本往往不適合攝影構圖，克服這個問題的辦法是轉動照相機，以使標本成比例得適合構圖的要求。但這時要進行操作顯微鏡來適合攝影構圖就更困難了。一般人們樂用的方法是轉動載物臺，將標本調到畫幅理想的構圖中。

二． 顯微攝影技術
1． 工作前的準備
(1) 光路系統的清潔　　顯微攝影必須保證光路系統的清潔，任何光學部件有了污垢及灰塵，均會影響照片的質量。物鏡、目鏡及聚光鏡等部件，如污垢長期得不到清理，還會引起霉菌的生長，致使不能應用。各部件在擦拭時，只能清理表面，而不應任意拆卸。
(2) 光軸中心的調整　　顯微攝影時光軸中心的調整是*不可忽視的，否則拍出的圖象，各部分的感光不勻。關于調整的方法前已述及，這里不予重復。
(3) 其它準備工作　　檢查鏡體與照相系統的安裝是否正確；根據被檢物體的情況選用何種感光片；如為半自動和全自動照相系統，需調節好相應的按鈕。拍攝前需用觀察目鏡觀察，先調好兩眼的瞳距，使兩個視場的象合而為一，再調節好兩眼的屈光度以適應觀察者的視力。
2． 視場光闌與孔徑光闌的應用
視場光闌的作用前已述及， 在觀察時根據物鏡的倍率不同視場光闌開大或縮小而給予相應的光束面積，以達到鏡檢的優良效果。在顯微攝影時它起著增加和減弱影象反差的作用。當視場光闌開大到一定程度時，照射到被攝物體上的光，即會產生反射與不規則的散射，造成影象反差的損失；當視場光闌收縮到取景框邊緣的外方時，圖象的反差就得到改善；視場光闌過度的收縮接近取景框，則圖象的四角部分將被切去。因此，在顯微攝影時，視場光闌的應用是重要的一個因素，應開啟到比取景框稍大的位置。
3． 人眼屈光度的校正
鏡檢時，每人眼睛的屈光度不盡都一致，總是存在著一定的差別。當甲看清視場中的圖象后，乙來觀察時就不一定清晰，這是由于兩人眼睛的屈光度有所不同而造成的，這一差別很易解決，只要調節一下微調焦旋鈕就很容易使圖象清晰。但是在顯微攝影時，用這種方法是不能解決的，因為上述是通過改變工作距離的長短來補償兩人的屈光度；而顯微攝影則必須使物鏡處于它本身的工作距離處，使成象清晰地落在感光片的平面處，才能使感光片得到清晰的圖象。往往有這樣的經驗，在視場中觀察到的圖象很滿意，可拍攝出來的底片則模糊不清，就是這個原因。
顯微攝影的調焦方法，必須利用取景側目鏡（聚焦望遠鏡）或取景目鏡，首*行屈光度的校正，即旋轉取景側目鏡或取景目鏡上的圓環，使取景框中的雙十字線達到*清晰的程度，這時再進行調焦使圖象清晰，便可進行曝光。但應指出，應用同一只眼睛調節，不然兩眼之間也會存在屈光度的差異。在調節雙十字線時，應盡快予以調整，否則長時間的調整，人眼將產生適應性，則不易調得準確，如遇此情況，可遠眺前方稍待一段時間后再進行調節。
在使用4X以下物鏡時，由于焦深較長，只用取景目鏡還會發生調焦的誤差，這時可利用“聚焦放大鏡”來克服誤差。其方法是將聚焦放大鏡放在取景側目鏡或取景目鏡上，擰緊固定螺釘，再旋轉該鏡筒上的圓環，看清雙十字線后物象是否同時清晰，如不清晰，再進行調節。在使用10X和20X物鏡時，當雙十字線與圖象同時清晰后，用眼環視一下，看雙十字線與圖象是否有移動現象，如果圖象不移動，則說明焦點已對準；如有移動，需用微調重新調節。
4． 曝光的補償