徠卡顯微鏡填充和組裝不同制造商高壓凝凍的視頻教程

高壓冷凍（HPF）是一種低溫定影法主要用于生物樣品，但也適用于各種非生物材料。它是能產生最佳保存在許多細胞類型和組織中或在有機和無機復合材料的技術。最常見的是，高壓冷凍樣品用經適當處理的光或電子顯微鏡進一步分析。為解決該采用HPF應用過多，有各種樣品的載體和試劑盒的系統。成功冷凍的一個重要方面是正確的和快速的處理樣品之前實際凍結。一個方面是不同的載流子的填充和組裝。

徠卡EM HPM100扁試樣系統

徠卡顯微鏡這個系統是最常用的，它存在于兩個變體：平檢體系統適用于3 mm的載體和用于6毫米載體。它適合的利用不同的培養細胞類型，細菌，藻類，動物和植物組織，等。樣品凍結在平板樣品載體通常進一步在冷凍置換部和樹脂嵌入處理的冷凍應用的陣列。

良好的冷凍樣品需要仔細地選擇冷凍冷凍保護/填充劑和特定的處理之前，以確保樣品的最佳的生理狀態，以及正確的處理，將來自抽樣變化進行采樣。我們不會詳細說明這些細節，但我們必須強調其重要性，并強烈建議進一步閱讀關于這個問題的。  

填補了運營商的時候簡單的規則：

避免過滿或欠填充作為運營商既會導致較差的冷凍效果。

避免樣品的機械損傷卻使載體，因為這會導致次優的質量

總是試圖找到樣本量和載大小之間的最佳關系。

定時是必要的。樣品操縱應減少到可能的最低水平。

徠卡EM HPM100管系統

管系統適合于在懸浮液中的樣品，但它主要是用于CEMOVIS應用（低溫電子顯微玻璃體部分中）。這種方法允許樣本完全水合和最小的，接近無分子聚合的研究。因此，當涉及到他們的原生狀態解決的分子結構是首選的方法。對于這個特定的應用程序將樣品剛好凍結之前與葡聚糖混合，以20％的終濃度。

一旦凍結的樣品可以被修整（銅容易被金剛石刀修整而不引起任何損害）并切片在冷凍超薄切片。有關詳情請參閱“簡介高壓凍結”。

填充管時，簡單的規則：

避免氣泡被截留，因為這會損害冷凍結果

避免保持樣品葡聚糖混合物太長凍結，因為這將導致在干燥的工件之前，并且影響樣品的生理狀態。

藍寶石系統6毫米徠卡EM HPM100

藍寶石光盤適合貼壁單層或CLEM（相關光學和電子顯微鏡）的應用研究。藍寶石具有優異的熱性能，是光鏡觀察或光刺激的應用非常方便。

填充管時，簡單的規則：

避免氣泡組裝兩個藍寶石的時候，因為這會損害冷凍效果，并可能導致藍寶石粉碎被困。

避免保持準備藍寶石樣本藍寶石組件太長凍結，因為這將影響樣品的生理狀態之前。

確保載體的細胞被標記以適當的方式（例如，碳涂覆的圖案），所以它可以很容易地在冷凍后和進一步加工期間進行區分的藍寶石

確認

我們感謝渡邊茂樹，美國猶他州大學的博士，他對影片的貢獻。