奧林巴斯顯微鏡熒光探針的激發效率

 一個熒光團的吸收光譜和熒光發射光譜分布是兩個必須在激光掃描共聚焦顯微鏡的應用選擇探頭時進行審議的*重要的標準。 除了吸收和發射帶的波長范圍內，摩爾消光系數為吸收和量子產率的熒光發射應予以考慮。 在激光激發水平不飽和的熒光團，熒光強度成正比的消光系數和量子產率的產物。 這種互動式教學探討如何這種關系可以被用來與特定的激光共聚焦顯微鏡熒光相匹配。

本教程初始化與光譜波長與相對強度的情節出現在窗口，并在圖形上顯示一個隨機選擇的熒光團的吸收光譜和熒光發射光譜圖。 疊加在熒光激發光譜是*接近常見的共聚焦激光譜線來的染料的*大吸收的中央。 在這個波長，熒光發射在理論上是可能的*接近的*高值與所述激光，并在教程的熒光發射曲線包含在由熒光團的消光系數的乘積和的發光強度所允許的強度的電平指示的色彩頻譜的填充。 在窗口下部的左角的發光強度框呈現在*大波長與熒光發射*密切相關的顏色。

為了操作的教程，使用波長滑塊來調整激光的選擇了由熒光團的吸收光譜配置文件規定的區域。 滑塊被限制在一個范圍內的光譜的端部，并且只能行駛到*近的激光線過去這些邊界。 作為虛擬激光線沿波長軸平移，教程計算出熒光團的摩爾消光系數和熒光量子產率的產物，并不斷更新所得到的值作為發光強度框下面的百分比，以提供相對熒光的定性測量發射，可以在相應的激發波長可以預期的。 同樣地，顏色的強度顯示在排放強度框發生改變以反映熒光發射的在所選定的激光源激發波長的相對強度。 每個波長有關的激光源顯示在以上波長滑塊一個黃色的盒子，并從激光的特定譜線上方的滑塊顯示。 熒光類可以使用在窗口的右手側上的單選按鈕進行選擇，個別的熒光團可以用選擇的染料下拉菜單被加載到顯示圖形。

目前可用于共聚焦顯微鏡的熒光探針的數量在數百運行時，與具有與普通激光譜線密切相關的*大吸收許多染料。 一個特定的激光線和*大吸收的特定探針之間的精確匹配并不總是可能的，但線的激發效率接近*大通常足以產生可容易檢測到的熒光發射的電平。 例如，在圖1中的兩種常見的探針的吸收光譜示出，隨著*高效激光激發線。 綠色光譜是異硫氰酸熒光素（FITC），它具有吸收*大值的495納米的吸收曲線。 的FITC熒光團在488納米使用氬離子激光的激發產生約87％的發射效率。 與此相反，當477納米或514納米的氬離子激光線被用來激發FITC，發光效率下降到僅58或28％，分別為。 顯然，在488納米的氬離子（或氪 - 氬）激光線是*有效的源此熒光團的激發。

紅色光譜在圖1中是的Alexa Fluor 546，一個雙磺化脂環呫噸（若丹明）衍生物與在556納米，它是專門設計來顯示增加的量子效率在光漂白的水平顯著降低*大消光系數的吸收曲線熒光實驗。 供的Alexa Fluor 546的*有效的激光激發光譜線是由氪 - 氬混合氣體離子激光器，其產生約84％的發光效率的黃色的568納米線。下一個*接近的激光譜線，從綠氦氖激光器的543納米線和594納米的線條從黃色氦氖激光器，激發的Alexa Fluor 546與43的效率和4％，分別為。 請注意，488納米氬離子激光譜線激發的Alexa Fluor 546約7％的效率，一個因素進行雙標記實驗，同時FITC和Alexa Fluor 546的時候，可以關注。